产品货号：
YT444
中文名称：
GL6-miR报告基因质粒
英文名称：
pGL6-miR reporter gene plasmid
产品规格：
1μg|100μg
发货周期：
1～3天
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pGL6-miR是一种用于microRNA(miRNA)等研究的萤光素酶报告基因质粒。该质粒可用于把目的基因的3'非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)或其它适当序列插入到其多克隆位点，然后在哺乳动物细胞中高灵敏度地检测特定microRNA(miRNA)或其它非编码RNA等对该基因3'-UTR或其它靶序列调控活性的报告基因质粒。pGL6-miR以百奥莱博的pGL6质粒为模板，具有氨苄青霉素抗性，并在萤火虫萤光素酶基因之后添加了多克隆位点，便于插入目的基因的3'-UTR或其它适当的靶序列。
pGL6-miR的主要工作原理是，把目的基因的3'非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)或其它适当序列插入到萤光素酶基因(luc2)的下游，转染细胞并检测萤光素酶的表达。如果细胞内源或外源表达的miRNA与靶序列结合，通常会抑制萤光素酶的翻译或促进mRNA的降解，从而使萤光素酶的表达量减少。因此通过本报告基因质粒检测萤光素酶的表达水平，可以检测内源或外源表达的miRNA是否对插入的靶序列有调控作用。并且可以通过靶序列中预测的miRNA结合位点的突变，用于比较突变前后萤光素酶表达水平的变化。如果预测的miRNA位点突变后，miRNA的调控作用消失，则基本上说明突变的位点就是miRNA在靶序列中具体的结合位点。
pGL6-miR带有中低等强度的PGK启动子，有利于检测miRNA等对于萤火虫萤光素酶表达水平的下调作用，即当miRNA的抑制作用较弱时也能检测到。并且PGK启动子可以在人、大鼠、小鼠甚至酵母细胞中都可以发挥作用。
| Base pairs | 6097bp |
| Feature Nucleotide | Position |
| PGK promoter | 20-538 |
| luc2 reporter gene | 549-2202 |
| Multiple cloning region | 2208-2261 |
| SV40 late poly（A） sinal | 2268-2512 |
| SV40 early enhancer/promoter | 2554-2972 |
| Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region | 2998-3792 |
| Synthetic poly(A) signal | 3817-3865 |
| Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region | 4980-5840 |
| Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site | 5945-6097 |
| 组分 | 1μg | 100μg |
| GL6-miR报告基因质粒 | 1μg | 100μg |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：-20℃
pGL6-miR质粒的多克隆位点的详细图谱如下(请特别注意其中的NheI不是单酶切位点)：
- pGL6-miR中没有的酶切位点包括：
Aat II Afl II Asc I Ase I Bsa I BsaA I BsiW I BssH II Eco72 I EcoR I Nde I Nru I PflM I Pme I Pml I Psp1406 I PspA I Rsr II Sam I SnaB I Spl I Srf I Tth111 I Vsp I Xcm I - pGL6-miR中的单酶切位点包括：
Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 9 Sal I G`TCGA,C 3881 BspM II T`CCGG,A 445 EcoN I CCTNN`N,NNAGG 3472 BsaB I GATNN|NNATC 997 Xba I T`CTAG,A 3796 BsrG I T`GTAC,A 1040 BsiC I TT`CG,AA 3867 Dra III CAC,NNN`GTG 1696 BstB I TT`CG,AA 3867 Acc65 I G`GTAC,C 2209 ApaL I G`TGCA,C 4445 Asp718 G`GTAC,C 2209 Ple I GAGTC 9/10 4510 Kpn I G,GTAC`C 2213 HgiE II ACCNNNNNNGGT -1/13 4710 BamH I G`GATC,C 2221 Not I GC`GGCC,GC 4951 EcoR V GAT|ATC 2229 BstX I CCAN,NNNN`NTGG 4975 PaeR7 I C`TCGA,G 2233 Pst I C,TGCA`G 4975 Xho I C`TCGA,G 2233 BstE II G`GTNAC,C 4978 Sac I G,AGCT`C 243 Ahd I GACNN,N`NNGTC 5053 Mlu I A`CGCG,T 2245 Bsu36 I CC`TNA,GG 5409 Bgl II A`GATC,T 2251 Pvu I CG,AT`CG 5423 HinD III A`AGCT,T 2257 Sac II CC,GC`GG 5447 Apo I R`AATT,Y 2361 Bst1107 I GTA|TAC 5563 Mun I C`AATT,G 2425 Xca I GTA|TAC 5563
pGL6-miR质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
Forward primer (2135-2154):5′GTTGGACGCCCGCAAGATCC 3′
Reverse primer (2303-2322):5′GGTTTGTCCAAACTCATCAA 3′
- 本质粒未经百奥莱博书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
- 插入靶序列：在pGL6-miR多克隆位点选取适当的酶切位点，经酶切处理后连入目的基因的3'-UTR或其它适当的靶序列。
- 以此质粒为模板构建的质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用百奥莱博的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(货号：YT272)或双荧光素酶报告基因检测试剂盒(货号：YT273)。
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